第一題    對于OATP1B1和1B3，采用共孵育也可以達到要求，是否還需要預孵育？

答：可以。由于OATP1B1和1B3抑制劑存在時間依賴效應，需要與轉運體細胞預孵育后再加入底物。這樣抑制效應會更明顯。

第二題    SLC轉運體細胞在藥物作用前去掉培養(yǎng)液后，是否需要用反應緩沖液預孵育幾分鐘？

答：需要加入反應緩沖液預孵育五分鐘使細胞適應新的緩沖體系。

第三題    SLC轉運體細胞藥物作用終止后，用乙腈、甲醇等有機溶劑或反復凍融方法是否都可以裂解細胞？

答：都可以。若乙腈、甲醇等有機溶劑影響后續(xù)檢測可采用反復凍融方法。

第四題    高通透性的化合物為什么不需要預孵育？透膜的能力是否和轉運蛋白結合能力一致？

答：高通透性的化合物是通過自由擴散進入細胞，預孵育可能使化合物不經(jīng)過轉運體就進入細胞了。其透膜的能力是和轉運蛋白結合的能力不一樣。

第五題    瞬轉SLC細胞在液氮凍存，時間久了是否會影響蛋白活性？

答：理論上液氮凍存時間久了不會影響蛋白活性。但對于不同批次的轉運體細胞需要穩(wěn)定性檢測進行評判。

第六題    囊泡的結果如何評判？

答：ABC轉運體需要ATP水解提供轉運所需能量，可設ATP處理組和AMP處理組，對比兩組囊泡對底物的轉運效果。

第七題    ABC轉運體和SLC轉運體是否對化學藥物分子大小、水溶性或脂溶性有選擇性？抗體藥或放射性標記的藥物是否具有選擇性？

答：ABC轉運體和SLC轉運體對化學藥物分子大小、水溶性或脂溶性是有選擇性。抗體藥一般不經(jīng)過轉運體轉運。

第八題    在運用SLC轉運體細胞的時候，為什么最高濃度藥物的攝取率比次高濃度藥物的攝取率突然增加幾十倍？

答：藥物可能與SLC轉運體細胞膜存在非特異性結合，藥物與SLC轉運體細胞孵育后洗滌不充分，最高濃度藥物組在細胞膜上殘留更多，導致最高濃度藥物的攝取率比次高濃度藥物的攝取率突然增加的假象。

第九題    ABC囊泡試驗AMP組底物攝取比ATP組高是何原因？

答：可能是底物與囊泡反應終止后ATP組底物從囊泡腔內(nèi)流回緩沖液。囊泡懸液轉移到過濾裝置必須迅速，并且必須遵循一致的時間軸，以實現(xiàn)低標準差和數(shù)據(jù)的可重復性。

第十題    ABC用Caco2體系需要考慮回收率，有化合物預試與Transwell膜沒有吸附，化合物溶解度也可以，在細胞中也是穩(wěn)定的，最后回收率還是偏低，還有哪些因素導致？

答：該化合物可能不僅僅是一種轉運體的底物。這種情況需要通過特定ABC或SLC的轉運體細胞進行驗證。

十一題    地高-辛的在MDCK-MDR1中的ER一般在什么范圍內(nèi)？范圍在200左右可以通過哪些條件進行調(diào)整？

答：有文獻報道地高-辛在MDCK-MDR1中的ER值為67（第十三次臨床藥理大會論文匯編，黎玉華，P88-P96。需要考慮細胞的生長狀態(tài)，單層細胞跨膜電阻、熒光黃在細胞單層中的表觀通透率等條件。

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